【壓縮機(jī)網(wǎng)】在現(xiàn)代化工作環(huán)境中，人們90％以上的時(shí)間都花在封閉的空間中，例如倉庫、辦公樓和工廠。在大多數(shù)室內(nèi)環(huán)境中，空氣中含有多種化學(xué)和微生物顆粒，這些通常被定義為室內(nèi)污染物，它們會(huì)嚴(yán)重影響人體健康和產(chǎn)品質(zhì)量（1）。食品和飲料，醫(yī)療設(shè)備和藥品制造商等行業(yè)依靠其合理性測(cè)試來確定工作流程中是否存在對(duì)產(chǎn)品的產(chǎn)量和安全性有害的問題。如果室內(nèi)或室外的環(huán)境空氣中都存在污染物，那它們必然也存在于衣服、身體和設(shè)備上。當(dāng)進(jìn)行交叉污染合理性和達(dá)標(biāo)性測(cè)試時(shí)（如壓縮空氣系統(tǒng)的微生物測(cè)試），某些污染物（例如細(xì)菌、酵母菌和霉菌）存在，就會(huì)出現(xiàn)問題影響測(cè)試準(zhǔn)確性。采用無菌技術(shù)就是為了防止這種情況出現(xiàn)。

 

　　國際標(biāo)準(zhǔn)化組織（ISO）和美國藥典（USP）在測(cè)試時(shí)對(duì)每個(gè)微生物程序部分都使用了無菌技術(shù)。該技術(shù)用于避免被測(cè)試的壓縮空氣樣本與您自己和周圍環(huán)境中的污染物交叉污染。如果操作不當(dāng)，測(cè)試結(jié)果則會(huì)出現(xiàn)誤報(bào)，并且常常會(huì)導(dǎo)致系統(tǒng)故障，從而使得成本增加還要承擔(dān)維護(hù)或重新測(cè)試的費(fèi)用。本文將重點(diǎn)了解無菌技術(shù)在壓縮空氣微生物檢測(cè)中的發(fā)展，實(shí)施和重要性。

 

　　評(píng)估樣品位置

 

　　要了解無菌技術(shù)首先需要了解微生物如何與周圍環(huán)境相互影響的。所說的環(huán)境包括壓縮機(jī)和使用點(diǎn)附近的環(huán)境空氣，采樣設(shè)備以及采樣技術(shù)人員本身。根據(jù)壓縮機(jī)所在的位置，它將吸入質(zhì)量水平不同的環(huán)境空氣。系統(tǒng)壓縮空氣，將其排入儲(chǔ)氣罐，然后在現(xiàn)場(chǎng)使用之前通過過濾器和干燥器系統(tǒng)（不是必需的，但強(qiáng)烈建議使用）后輸送空氣。一旦空氣通過管道分配到使用場(chǎng)地，就可以對(duì)其進(jìn)行微生物污染測(cè)試。

 

　　如果在使用點(diǎn)采樣區(qū)域周圍的環(huán)境中充滿灰塵或其他類型的顆粒物，則在采樣時(shí)，周圍空氣中的這些顆粒很可能會(huì)附著，影響微生物測(cè)試準(zhǔn)確性。例如，我們發(fā)現(xiàn)一些工廠在進(jìn)行分類、清潔或包裝某些商品的工作會(huì)產(chǎn)生大量顆粒物質(zhì)（如面粉、沙子、灰塵等），由于這樣的工作環(huán)境，幾乎不可能進(jìn)行簡單的微生物學(xué)測(cè)試。這些顆粒物質(zhì)充當(dāng)細(xì)菌，酵母或霉菌的媒介，并將其帶到新的位置。同樣可以帶到用于采樣的瓊脂糖板上。微生物非常小，很容易從一種環(huán)境傳播到另一種環(huán)境。像打噴嚏這樣簡單的事情可以在房間內(nèi)傳播數(shù)百萬種細(xì)菌。首先對(duì)周圍空氣中顆粒物含量高的區(qū)域進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，是評(píng)估使用點(diǎn)是否為測(cè)試必需點(diǎn)的好方法。如果由于無法以一定程度的清潔度取樣而導(dǎo)致交叉污染，很可能產(chǎn)生不準(zhǔn)確的結(jié)果，則可能需要將取樣器預(yù)裝在更“干凈”的區(qū)域。這可以幫助獲得使用點(diǎn)的更多較準(zhǔn)確結(jié)果。由于嚴(yán)格的規(guī)定和合規(guī)性程序操作，藥品和醫(yī)療設(shè)備的操作可能不會(huì)遇到此類問題。

 

　　自我評(píng)估

 

　　無菌技術(shù)的主要目標(biāo)是消除樣品與外部微生物樣品污染的可能性。最大的問題是人體中充滿了有益的和潛在的致病微生物。這些生存在人體內(nèi)和體表。一些簡單的個(gè)人防護(hù)設(shè)備和一些消毒劑可以幫助防止交叉污染。

　　手套

 

　　PPE的第一件也是通常最有效的是準(zhǔn)備一雙干凈的、合適的檢查手套（機(jī)械或布制手套是不同的）。不合適的手套的手指產(chǎn)生的松散的乳膠或腈綸可能會(huì)掉落到瓊脂糖板的表面并對(duì)其造成污染。檢查用的手套會(huì)在您和采樣介質(zhì)（通常是非選擇性瓊脂糖）之間形成一道屏障。疾病控制與預(yù)防中心指出，保持雙手清潔是我們可以采取的最重要的步驟之一，可以避免細(xì)菌傳播給他人和其他表面（2）。人們上過廁所、處理生肉、觸摸粘膜、觸碰衛(wèi)生狀況差的東西以及接觸其他受污染的物體（如門、把手、桌子），微生物就會(huì)接觸到手上。保護(hù)壓縮空氣微生物樣本免受污染是確保報(bào)告結(jié)果準(zhǔn)確的最佳方法。一旦戴上手套并噴上消毒劑（乙醇、漂白劑或異丙醇）后，請(qǐng)勿觸摸工作表面以外的任何表面。人們通常甚至沒有意識(shí)的觸碰到他們的眼睛、鼻子和嘴巴。如果存在交叉污染的可能性，請(qǐng)?jiān)跍y(cè)試之前更換手套或清潔手套表面。

 

　　實(shí)驗(yàn)室外套/圍裙

 

　　要注意衣服和手臂也是潛在的污染源。干凈、合適、可清洗或一次性的實(shí)驗(yàn)室外套是PPE的另一種必要形式，它可以避免在采樣和測(cè)試過程中附著在衣服和皮膚上的微生物脫落到瓊脂糖板上。這些實(shí)驗(yàn)室外套需要清洗。臟的實(shí)驗(yàn)室外套和根本沒有穿實(shí)驗(yàn)室外套情況是一樣的。此外，如果有溢出物（酒精或消毒劑）或瓊脂糖板掉在身上，穿著實(shí)驗(yàn)室外套將使您保持清潔。

　　面具

 

　　人們通常不會(huì)意識(shí)到有多少微生物附著在他們的嘴巴和鼻子里。人口腔中的微生物眾多，有一項(xiàng)名為“人口腔微生物組”的專門研究組織（3）。平均一張嘴可以容納60億個(gè)多種細(xì)菌，與73億人口的地球相比，這個(gè)數(shù)字令人震驚。每次我們說話、咳嗽、打噴嚏、呼氣的時(shí)候，唾液和微生物都會(huì)離開我們的嘴和鼻子。這些飛沫中的大多數(shù)微生物會(huì)降解無法長時(shí)間存活，但研究表明，打完噴嚏后，微生物可以在生物氣溶膠（噴嚏或咳嗽的液體）中存活最長時(shí)間為45分鐘（4）。因此，打開瓊脂糖等微生物測(cè)試板時(shí)，遮住鼻子和嘴很重要。

 

　　消毒劑

 

　　消毒劑是用于消除或減少物體表面上有害微生物的溶液。使用消毒劑跟殺死所有微生物的滅菌過程不同。數(shù)百年來，酒精一直被用作消毒劑。醇基消毒劑中最常見的是乙醇和異丙醇。由于某些微生物（如細(xì)菌）的結(jié)構(gòu)，暴露于體積分?jǐn)?shù)70％乙醇或異丙醇醇的溶液將導(dǎo)致生物體的外細(xì)胞膜降解并最終死亡。當(dāng)酒精濃度高于或低于70％時(shí)，效果反而不會(huì)很好。體積分?jǐn)?shù)10％漂白劑（次氯酸鈉）的溶液像酒精一樣通過降解微生物的蛋白質(zhì)而導(dǎo)致細(xì)胞死亡。使用消毒劑噴涂手套，工作臺(tái)和采樣器內(nèi)部的表面，這些簡單操作足以在使用點(diǎn)之間保持清潔，以獲得準(zhǔn)確的結(jié)果。

 

　　當(dāng)使用無菌技術(shù)測(cè)試壓縮空氣微生物樣品時(shí)，這些必要的PPE物品是可以有效避免交叉污染的。如果技術(shù)人員有胡須或長發(fā)，則始終建議使用發(fā)網(wǎng)。當(dāng)使用消毒噴霧劑和準(zhǔn)備壓縮空氣進(jìn)行采樣時(shí)保護(hù)眼睛非常重要。

 

　　培訓(xùn)無菌技術(shù)(表1)

 

　　足夠的無菌技術(shù)培訓(xùn)包括許多組成部分。其中包括測(cè)試環(huán)境的準(zhǔn)備，測(cè)試人員準(zhǔn)備和產(chǎn)品操作（5）。表1是根據(jù)Brown的圖表改編而成，其中概述了符合ISO 8573-7標(biāo)準(zhǔn)的壓縮空氣（沖擊取樣器）微生物測(cè)試的培訓(xùn)準(zhǔn)則。使用培訓(xùn)大綱的目的是允許對(duì)績效進(jìn)行評(píng)分并確定特定領(lǐng)域，以便將來進(jìn)行重新培訓(xùn)。該表包含要評(píng)估的部分，基于標(biāo)準(zhǔn)描述的等級(jí)及其引起污染，需要改進(jìn)或在實(shí)踐中可接受的可能性。

 

　　需要評(píng)估的部分包括個(gè)人防護(hù)設(shè)備，消毒劑和清潔規(guī)程，采樣設(shè)備的操作以及設(shè)備的使用，檢查最終產(chǎn)品并且包裝樣品以便運(yùn)輸或處理。這些都包括無菌技術(shù)流程，該流程將限制或消除從采樣設(shè)備到樣板分析過程中的任何交叉污染情況。操作人員應(yīng)充分閱讀標(biāo)準(zhǔn)，并使其應(yīng)用到所使用的采樣設(shè)備。該標(biāo)準(zhǔn)的大部分內(nèi)容足夠廣泛，可以由所有技術(shù)水平人員實(shí)施。同時(shí)建議在經(jīng)過理解無菌技術(shù)討論之后，進(jìn)行技術(shù)人員技能的基準(zhǔn)考核。該基線將使培訓(xùn)師了解哪些地方需要改進(jìn)或哪些技能需要再次解釋概念。由于大多數(shù)清潔和費(fèi)力的方案會(huì)隨著時(shí)間的推移而退化，因此建議每兩年進(jìn)行一次評(píng)估，以評(píng)估技術(shù)是否隨時(shí)間推移更新。

 

　　壓縮空氣系統(tǒng)中的微生物表明與進(jìn)水泵附近的廢水相關(guān)的病原體有潛在存在的可能性，系統(tǒng)配管的預(yù)防性維護(hù)不夠全面以及標(biāo)準(zhǔn)要求不夠完整。要確保人員有足夠的準(zhǔn)備從任何設(shè)施系統(tǒng)中采樣微生物，全面而有依據(jù)的培訓(xùn)至關(guān)重要。壓縮空氣系統(tǒng)是獨(dú)特的；ISO和USP具有專門設(shè)計(jì)的用于微生物污染物分析的標(biāo)準(zhǔn)，這些標(biāo)準(zhǔn)利用了陰性對(duì)照，百葉窗和無菌技術(shù)。正確操作完成后，結(jié)果將以清晰的采樣日?qǐng)D像呈現(xiàn)。如果遵循ISO 8573-7標(biāo)準(zhǔn)，則將存在無菌空白樣本（陰性對(duì)照伴隨測(cè)試樣品但從未打開），兩個(gè)百葉窗分別在采樣之前和之后測(cè)試技術(shù)人員的無菌技術(shù)，還有實(shí)際使用處的樣本。如果任何ISO 8573-7百葉窗都含有污染物，則很難說清楚是哪個(gè)系統(tǒng)污染了測(cè)試板，因?yàn)闇y(cè)試板也具有污染源（周圍環(huán)境或壓縮空氣）。更具體地說，如果前百葉窗被2個(gè)菌落形成單位（CFU）污染，并且使用點(diǎn)測(cè)試板被1 CFU污染，而后百葉窗沒有明顯的污染，那么現(xiàn)在對(duì)使用處的數(shù)據(jù)要進(jìn)行一定程度的審查。不能保證測(cè)試板上的污染與前百葉窗的污染不同。同樣，如果百葉窗被污染但壓縮空氣樣品未被污染，則應(yīng)重新評(píng)估采樣技術(shù)人員的無菌培訓(xùn)。理想的情況是百葉窗很干凈和低于極限的測(cè)試板報(bào)告。

 

　　總而言之，不能取消對(duì)人員進(jìn)行無菌技術(shù)培訓(xùn)。微生物結(jié)果可以表明是否充分遵循了操作規(guī)程或是否需要進(jìn)行再培訓(xùn)。無論哪種情況，進(jìn)行文件記錄和半年培訓(xùn)評(píng)估都可以幫助更新技術(shù)和形成準(zhǔn)確的壓縮空氣微生物報(bào)告。被污染的百葉窗和壓縮空氣微生物樣品會(huì)增加重新測(cè)試費(fèi)用和人工成本，測(cè)試結(jié)果誤報(bào)可能導(dǎo)致使用點(diǎn)的關(guān)閉以及如果召回產(chǎn)品則會(huì)降低產(chǎn)品的完整性。

 

　　作者簡介

 

　　Maria Sandoval在微生物學(xué)和分子生物學(xué)方面擁有15年以上的經(jīng)驗(yàn)。她的現(xiàn)場(chǎng)工作包括分析從俄羅斯貝加爾湖深處到切爾諾貝利50公里禁區(qū)的極端微生物。此外，她還與CDC一起使用DSHS分析和診斷患者的菌群。她在勞倫斯伯克利國家實(shí)驗(yàn)室、州衛(wèi)生服務(wù)部、德克薩斯大學(xué)MD安德森癌癥中心的任職期間的優(yōu)秀表現(xiàn)，使她成為微生物檢測(cè)領(lǐng)域的領(lǐng)先專家。作為Trace Analytics的微生物學(xué)家和實(shí)驗(yàn)室主任，她負(fù)責(zé)微生物測(cè)試和程序開發(fā)。

 

　　Trace Analytics是A2LA認(rèn)可的實(shí)驗(yàn)室，專門從事食品和飲料生產(chǎn)設(shè)施的壓縮空氣和氣體測(cè)試。他們使用ISO 8573采樣和分析方法，對(duì)壓縮空氣中發(fā)現(xiàn)的顆粒（0.5-5微米）、水、油霧、油蒸氣和微生物污染物進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)室測(cè)試。在過去的29年中，他們一直堅(jiān)持最高的健康和安全行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，并在全球范圍內(nèi)按照ISO、SQF、BRC和FDA的要求提供較高的質(zhì)量服務(wù)。

 

　　參考文獻(xiàn)

　　1. Tamburini, E., Donega, V., Marchetti, M.G., et.al. (2017, July 17). Study on Microbial Deposition and Contamination onto Six Surfaces Commonly Used in Chemical and Microbiological Laboratories. Int. J. Environ Res Public Health. 12(7):8295-8311.

　　2. Centers of Disease Control and Prevention. (n.d.) Show Me the Science- Why Wash Your Hands? Retrieved April 15, 2019 from, https://www.cdc.gov/handwashing/why-handwashing.html? s_cid=ostltsdyk_cs_679.

　　3. Human Oral Microbiome Database. (n.d.) Human Oral Microbiome. Retrieved April 15, 2019 from, http://www.homd.org/.

　　4. Bowler, J. (2017, June 20). Bacteria in your Coughs and Sneezes Can Stay Alive in the Air for up to 45 Minutes. Retrieved April 18, 2019 from, https://www.sciencealert.com/bacteria-in-your-coughs-andsneezes-

　　can-stay-alive-in-the-air-for-up-to-45-minutes.

　　5.Brown, M.C., Conway, J., Sorensen, T.D. (2006, December 15). Development and Implementation of a Scoring Rubric for Aseptic Technique. Am J Pharm Educ. 70

 

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